流式细胞术（flow cytometry）
流式细胞术实验方案
流式细胞术（FC）
流式细胞术（Flow Cytometry，FC）是一种强大的工具，可应用于免疫学、病毒学、分子生物学和癌症生物学等多个学科。通过检测悬液中的单个细胞或其他生物粒子上所标记的荧光信号，分析每个颗粒的可见光散射和荧光参数，来对单个细胞或生物粒子进行定量分析和分选。
一、相关试剂配方
1. 从细胞间获取细胞，在96孔板中，单孔细胞量需要达到5x105~1x106个细胞。将获取的细胞以1500 rpm/min离心5 min，弃上清。
2. 加入固定液4% PFA，室温固定15 min。或者加入冰甲醇，固定15 min。
3. 移除固定液，1×PBS室温清洗2次，每次5 min。
4. 移除1×PBS，加入细胞储存液，保存于2~8°C。
三、通透和封闭
在固定步骤中使用了甲醇等有机溶剂固定液时，无需进行通透这个步骤，注意过度通透会破坏细胞结构并导致信号丢失，需严格把控浓度和时间。
1. 加入通透液，室温孵育10 min。
2. 移除通透液，加入足量封闭液，室温孵育15 min。
四、抗体孵育
1. 根据说明书用1×PBS稀释一抗。
2. 封闭后的细胞混匀，转至96孔V型板中，1500 rpm/min离心5 min，弃上清，加入稀释好的一抗，混匀，室温孵育15 min。
3. 移除一抗，加入1×PBS，室温清洗1次。
4. 移除1×PBS，加入荧光二抗，混匀，室温避光孵育15 min。
5. 移除二抗，加入1×PBS室温清洗2次，每次5 min。
6. 加入1×PBS重悬细胞，上流式细胞仪检测。
*该协议仅供参考。请优化程序，因为不同样品的实验条件可能有所不同。